乳果糖檢測不再是難題，安譜實驗助力復原乳鑒定
A：最近保健品質量亂象頻頻被曝，感覺走親訪友還是送乳制品比較放心，但是市面上乳制品品牌眾多，我們也不太清楚如何區分哪些乳制品中添加了復原乳？
B：NY/T 939-2016“巴氏殺菌乳和UHT滅菌乳中復原乳的鑒定”中指出可以通過乳果糖含量來判斷巴氏殺菌乳和UHT滅菌乳中是否添加復原乳。
C：2018年2月發布的國家食品安全標準關于生乳、巴氏殺菌乳、滅菌乳、和復原乳鑒定第一次討論稿中滅菌乳標準中乳果糖含量作為理化指標被要求；復原乳鑒定標準中完善了乳果糖測定方法中的試劑配制。
D：那么到底如何測定乳果糖來鑒定復原乳呢？
聚光科技（杭州）股份有限公司下屬子公司上海安譜實驗科技股份有限公司（以下簡稱“安譜實驗”）利用快速檢測試劑盒的方法對乳果糖進行檢測并提供全套解決方案和試劑耗材。
配套產品，一鍵采購試劑盒，解決繁瑣采購
搭配乳果糖和D- 果糖分析物標準物質；
試劑盒滿足50次檢測，避免拼湊購買造成的浪費；
提供試劑盒內試劑的單獨購買；
方便、快捷、省時
直接提供預配置的測試液，避免繁瑣的配制；
試劑盒方法原理同NYT 939-2016；
和NY/T 939-2016方法相比，試劑盒方法節省3h，完成反應僅需2h；
Megazyme Mega-CalcTM一鍵數據處理，準確、方便；
安譜實驗提供人性化選購、咨詢、售后等客戶體驗服務
吸光度不穩定、平行性不好、數據準確度不高、實驗細節把握不好，通通不是問題，安譜實驗資深技術人員手把手指導和解答。
取某品牌市售純牛奶（記為原奶），并將其分別稀釋2倍，5倍，10倍（記為原奶*2，原奶*5，原奶*10）待取用；分別取原奶、原奶*2，原奶*5，原奶*10、和100 ppm標準品各0.5 mL于1.5 mL離心管中，加入0.2 mL磷酸鈉緩沖液、0.7 mL去離子水、0.05 mL硫酸鋅溶液、0.05 mL亞鐵氰化鉀溶液，混合均勻，在13000轉速下離心10 min，沉淀牛奶中的蛋白質和脂肪，吸取上清液進行實驗。
注意事項：
離心后溶液應該為澄清的溶液，否則建議稀釋樣品或者再分別加入0.05 mL沉淀試劑：硫酸鋅溶液和亞鐵氰化鉀溶液（為避免誤差，加入沉淀劑的情況也請考慮沉淀劑對樣品的稀釋影響）；
樣品沉淀以后應該為澄清的溶液，取上清液時注意不要將沉淀吸入。
檢測樣品包括：
| 樣品 | 原奶 | 原奶*2 | 原奶*5 | 原奶*10 | 100ppm標品 | |||||
| 兩個平行樣 | 兩個平行樣 | 兩個平行樣 | 兩個平行樣 | 兩個平行樣 | ||||||
| 編號 | A | B | C | D | E | F | G | H | I | J |
| A空白 | B空白 | C空白 | D空白 | E空白 | F空白 | G空白 | H空白 | I空白 | J空白 | |
二、酶解實驗
分別吸取0.5 mL的上清液于1.5 mL的離心管中（其中編號A-J為樣品，加入β-半乳糖苷酶進行酶解；A空白-J空白為空白樣，不加β-半乳糖苷酶；空白樣的目的是扣除空白）。
每個樣品分別按照以下步驟進行實驗：
| 添加溶液 | 添加體積數 | |
| A-J 樣品 | A-J 空白 | |
| 樣品前處理后的上清液 | 0.50 mL | 0.50 mL |
| 乙酸鈉緩沖液（0.2 M） | 0.10 mL | 0.10 mL |
| 去離子水 | - | 0.05 mL |
| 瓶1（β-半乳糖苷酶） | 0.05 mL | - |
| 漩渦混合，并于40℃水浴中反應1小時，然后分別加入以下溶液，每加一個溶液，要蓋上螺帽進行漩渦混合。 | ||
| TEA緩沖液（1 M）/硫酸鎂（10 mM） | 0.50 mL | 0.50 mL |
| 氫氧化鈉溶液（0.33 M） | 0.05 mL | 0.05 mL |
| 辛醇 | 0.01 mL | 0.01 mL |
| 瓶2懸浮液（葡萄糖氧化酶和過氧化氫酶） | 0.05 mL | 0.05 mL |
| 30%過氧化氫 | 0.02 mL | 0.02 mL |
| 加完后蓋上螺帽于40℃水浴中反應15min，15min后于13000rmp離心10min，取上清液作為酶測試反應。注意：加入過氧化氫后不管是樣品還是樣品空白會產生氣泡，無氣泡產生說明實驗可能失敗。 | ||
三、酶測試反應
| 添加溶液 | 添加體積數 | |
| A-J 樣品 | A-J 空白 | |
| 樣品酶解實驗后的上清液 | 1.00mL | 1.00 mL |
| 瓶3緩沖液 | 0.05 mL | 0.05 mL |
| 瓶4稀釋液（NADP+/ATP) | 0.05 mL | 0.05 mL |
| 將上述溶液分別加入一次性的比色皿中，每加一個溶液蓋上比色皿蓋子手動搖晃均勻，然后反應3min，在340nm處檢測紫外吸光度，讀數為A1，然后加入以下溶液進一步反應。 | ||
| 瓶5懸浮液（HK/G-6-PDH) | 0.02 mL | 0.02 mL |
| 瓶6懸浮液（6-PGDH) | 0.02 mL | 0.02 mL |
| 每加一個溶液蓋上比色皿蓋子手動搖晃均勻，然后反應10min，在340nm處檢測紫外吸光度，讀數為A2，然后加入以下溶液進一步反應。 | ||
| 瓶7懸浮液（PGI) | 0.02 mL | 0.02 mL |
| 加入以上溶液手動搖晃均勻，然后反應15min，在340nm處檢測紫外吸光度，讀數為A3。注意：在檢測紫外吸光度A1-A3過程中，吸光度的大小會在一定范圍內波動，波動過大或者不穩定請排查各個實驗步驟，找出問題。 | ||
四、數據分析
將測試的數據代入乳果糖試劑盒的Megazyme Mega-CalcTM進行計算（在Megazyme下載），得出檢測數據：
| 樣品 | 原奶 | 原奶*2 | 原奶*5 | 原奶*10 | 100ppm標品 | |||||
| 兩個平行樣 | 兩個平行樣 | 兩個平行樣 | 兩個平行樣 | 兩個平行樣 | ||||||
| 編號 | A | B | C | D | E | F | G | H | I | J |
| 計算最終濃度（ppm） | 474.6 | 472.2 | 484.8 | 487.4 | 484 | 499.7 | 493.7 | 500.9 | 97.3 | 101.6 |
| 平均值 | 473.4 | 486.1 | 491.8 | 497.3 | 99.5 | |||||
| 結論 | A3-A2＞1.5，需對樣品進行稀釋；檢測值偏低 | 樣品稀釋2倍，5倍，10倍后通過Megazyme Mega-CalcTM進行計算，換算為原奶含乳果糖濃度，相互比較，誤差都在2%以內，符合檢測要求。 | 平行樣檢測的數值與標準樣品的濃度相符，平行樣差值低于1%。 | |||||||
產品信息
| 貨號 | 名稱 | 規格 | 價格 |
| CFHN-K-LACTUL | 乳果糖分析試劑盒 | 50 assays | 3104 |
| CFEQ-4-120084-0250 | 磷酸氫二鈉，ACS， | 250g | 436 |
| CFEQ-4-120023-0250 | 磷酸二氫鈉一水化合物，ACS，Reag. Ph. Eur.，98.0-102.0% | 250g | 210 |
| CFEQ-4-198525-1000 | 無水硫酸鎂，≥98.0%，for analysis，粉末狀 | 1kg | 463 |
| CFEQ-4-198528-0500 | 無水乙酸鈉，(Reag. Ph. Eur.) ACS，≥99.0% | 500g | 490 |
| CFEQ-4-111615-0500 | 三乙醇胺，≥99.0% | 500ml | 144 |
| CFEQ-4-120033-0250 | 亞鐵氰化鉀三水合物，for analysis，98.0% | 250g | 353 |
| CFEQ-4-120050-0250 | 硫酸鋅七水化合物，ACS，ISO， | 250g | 419 |
| CFEQ-4-120045-0500 | 氫氧化鈉，for analysis ，≥ 97.0% | 500g | 342 |
| CFEQ-4-531046-0005 | 1-辛醇，≥98.0% | 5mL | 88 |
| CFEQ-4-110013-0500 | 雙氧水（過氧化氫）， 27% w/w | 500mL | 275 |
| AGEQ-2722120 | CUVETTES 1.6ml 一次性UV 比色皿，半微量池、100/盒 | 100/盒 | 430 |
| AGEQ-2722110 | CUVETTES 4.0ml 一次性UV 比色皿、100/盒 | 100/盒 | 380 |
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